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DNA电泳原理

DNA电泳原理

生物大分子在一定pH条件下，通常带电荷，将其置于电场中，会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移，迁移速度称电泳速率。

电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比，与分子与介质的摩擦系数成反比。

摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。

在生理条件下，DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态，故DNA实际上呈多聚阴离子状态，在电场中向 正极方向迁移。

糖-磷酸骨架在结构上重复，故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。

如电场强度一定、电泳介质相同，电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。

构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。

LF—CZ05A/B/C型 高通量垂直电泳槽

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产品特点：

正负电极的铂金丝直径均为0.26mm，纯度为99.95%，

结实耐用，电场稳定。

双板一次可跑204个电泳样品，大大提升了实验效率。

凝胶玻璃板与边长一体化设计，让操作更简单。

可同时运行2块300×105mm的电泳凝胶。

技术参数：

电泳槽正负电极的铂金丝直径均为0.26mm，

纯度为99.95%。

凝胶面积：300×105mm。

凝胶标准厚度：1mm。

样品梳标准齿数：102齿（可以选配64齿）。

样品梳标准厚度：1mm。

蛋白电泳制胶

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制胶

将玻璃板洗净晾干，将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠（薄板向外），放入制胶框内（如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐），将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。

用手捏紧制胶架上的固定夹，将整个制胶框置于制胶架上，松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。

向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器)，先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。

浓缩胶灌满后，插入样品梳，待30至45分钟凝胶完全聚合后，制胶完成。

蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳

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a，将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上

b，将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个，此时凝胶板相对中心有30 度夹角，放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒，在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜（注：凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧，同时，控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件，如果运行1 或 3 块胶时，须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶）。槽内转印模块可与LF-Mini2型小型垂直电泳槽的上盖与下槽配套使用。

c，用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条，确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板，另一只手将控制夹板合拢在胶板上，使其锁定到位。

d，电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯：带插头电泳槽内芯在后，蘑菇头电泳槽内芯在前，如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯，将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应，如需做 4 块胶，除放入带插头电泳槽内芯外，还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置，确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应（注意：位置和方向的错误会使上盖无法盖合）。3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为250ng。

e，将上盖盖在电泳槽下槽上，确认插头位置正确（上盖上的障碍物可以防止定位错误）。

f，将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内，恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行，SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。

g，电泳完成后关断电源，拔出电源插头，移开上盖，小心取出电泳槽内芯，倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。